2025 г., № 4 Раздел: Химия природных сред и объектов УДК: 602:604
Получение гетерологичных продуцентов рамнолипидов на основе Acetobacter aceti AlC1824
М.Н. Барамзин, С.Г. Литвинец
ФГБОУ ВО "Вятский государственный университет"
Рамнолипиды солюбилизируют нефтяные загрязнения почв, делая их более доступными для разложения почвенными микроорганизмами. В отличие от химических поверхностно-активных веществ, рамнолипиды безопасны для окружающей среды. Целью данной работы является получение гетерологичных продуцентов рамнолипидов на основе Acetobacter aceti AlC1824 с использованием искусственного промотора и оптимизация условий культивирования продуцента. Данный путь позволит избежать использования в качестве продуцента рамнолипидов условнопатогенного вида Pseudomonas aeruginosa, который может быть применён для биоремедиации почв. Кластер генов rhlAB амплифицировали из генома Pseudomonas aeruginosa B-6643 путём полимеразной цепной реакции. В p-AlT2 вектор встроили конструкцию, состоящую из кластера генов rhlAB и искусственного промотора. Путём кальциевой трансформации вставку ввели в клетки Acetobacter aceti AlC1824. С помощью колориметрической системы отбора рекомбинантных клонов – бело-голубой селекции отобрали 20 трансформантов. Обнаружили целевую вставку при помощи полимеразной цепной реакции у 7 трансформантов. В ходе индикаторного теста характерный осадок обнаружен у двух трансформантов: А4 и А8. Установлены подходящие для культивирования трансформантов источники азота (пептон) и углерода (маннитол). Определён ряд параметров: оптимальное значение кислотности среды – pH 5, оптимальное значение температуры культивирования у трансформанта А4 – 30 оС, у трансформанта А8 – 25 оС. Количество образуемых в оптимальных условиях рамнолипидов составило для А4 – 139,3±20,1 мг/мл, для А8 – 13,0±1,0 мг/мл. Экспериментально показана высокая отмывающая способность в отношении сырой нефти рамнолипидов гетерологичных продуцентов: А4 – 93,9±1,5% и А8 – 96,7±1,5%.